流式细胞术是一项利用流式细胞仪，对单列快速直线流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定性和定量分析或分选的技术。该技术具有检测速度快、测量指标丰富、数据采集量大、分析全面、分选纯度高及灵活性强等优点。Z6·尊龙凯时的专家总结了流式实验中常见的三大问题，希望能够帮助大家有效规避实验陷阱！

无信号或信号弱的可能原因及解决方案

以下是导致检测结果无信号或信号减弱的几种可能性及其解决措施：

• 抗体贮存不当：抗体应保持在2-8℃并避光存储，同时应避免反复冻融。
• 抗体过期：使用在保质期内的抗体以确保其活性。
• 过度固定：尽量选择新鲜样本进行检测，可进行预实验以确定适合样本的固定剂及条件。
• 荧光染料淬灭：抗体及染色后的样本应避光保存，染色后应尽快进行测定。
• 自发荧光过高：可用空白对照确认自发荧光水平；还可以根据“荧光素强度”及“相互干扰程度”等原则选择合适的流式抗体染色时间和温度。
• 浓度及细胞数量问题：适当调整抗体浓度，确保细胞密度在适合范围内（通常小于1×10⁷个/ml）。

荧光强度过高的可能原因及解决方案

荧光强度过高可能由以下原因导致：

• 染色时间太长：根据说明书调整抗体染色条件，并根据实验情况适时调整。
• 抗体浓度过高：滴定抗体以确定最佳浓度。
• 补偿不当：选择发射光谱不重叠的染料，并检查相应的补偿设置。
• 洗涤不充分：优化洗涤步骤，增加洗涤次数以清除多余的荧光素。

背景高的可能原因及解决方案

背景信号过高常见原因及解决措施如下：

• 死细胞或粘连体：使用新鲜样本及死活染料排除死细胞；样本处理后过筛以去除组织团块。
• 染色时间过长：根据说明书调整染色时间以避免信号增强。
• 洗涤不充分：增加洗涤次数，确保细胞与杂质充分分离。
• 自发荧光：使用空白对照检测自发荧光水平，同时优化染色及封闭步骤。

在实际操作中，实验结果可能受到多种因素的影响，如抗体选择、样本制备、实验操作及仪器设置等。Z6·尊龙凯时期待通过以上常见异常情况及解决方案，帮助大家优化实验流程，提升实验结果！如需了解更多流式实验干货，请持续关注Z6·尊龙凯时！