### 支原体的概念与污染影响

支原体（Mycoplasma），又称霉形体，是已知的最小、最简单的无细胞壁原核生物，直径为0.1至0.3μm，能够通过滤膜，具有高度的多形性。在哺乳动物细胞培养中，支原体是相对常见且难以检测的污染物。由于其能形成丝状和分枝状结构，因此被称为支原体。

在生物学分类中，支原体属于柔膜菌门和柔膜菌纲，并进一步细分为多个目、科和属。研究较多的支原体目和支原体科主要包括支原体属和脲原体属。

支原体污染会对细胞培养产生多方面的不良影响，形成了细胞培养中的一个严重问题。根据保守估计，常规细胞培养的支原体污染率高达15%至35%，这严重干扰了实验结果的可靠性。数据显示，95%的支原体污染主要由莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、口腔支原体、发酵支原体以及其他几种引起。

支原体能够在培养基中形成“煎鸡蛋”形状的菌落，并且细胞培养的上清液和细胞膜为其生长提供了合适的环境。支原体可以寄生在细胞表面，甚至穿透宿主细胞膜。

支原体污染的主要来源包括细胞培养液及其成分（如培养基原料、血清和其他试剂）、实验室操作人员、细胞培养箱、液氮培养箱、空气中的微粒和气溶胶、过度使用抗生素、不当密封的细胞培养物以及污染了支原体的细胞等。

这些污染可能带来的危害包括：导致细胞制品在下游纯化过程中未能有效去除支原体，造成批次报废；污染所有接触的相关设备和中间产品；可能导致其他正常细胞受到污染；以及破坏实验室整体环境，迫使停止生产或实验操作以进行支原体去除，从而增加去除难度。

因此，定期进行支原体检测与去除是确保细胞培养体系内无支原体存在的必要措施，从而保障科学研究的正常进行。

### 支原体检测方法简介

在生物制药和细胞研究中，支原体污染是影响实验结果和产品质量的严重问题。因此，支原体检测对于确保细胞培养物和生物制品的安全性和可靠性至关重要。

当前常用的支原体检测方法包括培养法、PCR（聚合酶链式反应）法、荧光染色法、ELISA（酶联免疫吸附试验）法、qPCR（实时定量PCR）、以及代谢活性测定（如ATP酶法）等。每种方法各有优缺点：

1. **培养法**: 灵敏度高，专属性强，但需建立P2实验室，检测周期长达28天且可能存在交叉污染。

2. **指示细胞法**: 灵敏度低但成本较低，常用且药典推荐，但检测周期长达7天。

3. **NAT法**: 灵敏度高，通常用于替代传统方法，但结果依赖于样本质量，并可能因交叉污染造成假阳性。

4. **ELISA法**: 实验简单快捷，但依赖于抗体，有局限性。

5. **ATP酶法**: 灵敏度高但需搭配荧光检测仪器。

6. **等温扩增法**: 操作简单快速，但易受样本干扰。

在选择合适的支原体检测方法时，应考虑检测结果的用途、是否符合法规药典要求，以及方法的验证情况。对于涉及产品放行的检测，应使用药典规定的培养法或指示细胞法，或经过验证与药典方法可比的NAT法（如qPCR法）。而对于日常检测的细胞或者早期研发细胞，快速支原体检测方法应是首选，如巢式PCR法、LAMP等温扩增法等。

### Z6·尊龙凯时的支原体PCR检测试剂盒（巢式PCR）(2G)介绍

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