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Z6·尊龙凯时 GPCR19激动剂操作指南

发布时间:2025-03-25   信息来源:乔德启

Z6·尊龙凯时的GPCR19激动剂操作规程如下:

Z6·尊龙凯时 GPCR19激动剂操作指南

1. 细胞接种

在96孔板中每孔加入100μL细胞悬液。对于细胞增殖实验,通常每孔接种2000个细胞,而在细胞毒性实验中,每孔则加入5000~10000个细胞。具体接种的细胞数量应根据细胞大小及增殖速度进行调整。将96孔板置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养24小时。

2. 加入化合物

向每孔中添加适量的0~10μL受试化合物以进行后续实验。

3. 孵育

将96孔板放置在37℃、5% CO2及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当的时间,确保细胞对化合物的反应。

4. 准备MTT溶液

将5×MTT用稀释液稀释为1×MTT溶液,以备后续实验使用。

5. MTT还原反应

向每孔中添加50μL的1×MTT溶液,并在37℃下孵育4小时,以使MTT还原为紫色的甲臜。

6. 溶解甲臜

吸出每孔的上清液,然后加入150μL的DMSO以溶解甲臜,使用平板摇床摇匀,以确保完全溶解。

7. 光密度测定

使用酶标仪在570nm波长下检测每个孔的光密度。如果没有570nm的滤光片,也可以使用560-600nm的滤光片进行检测。

8. 结果分析

a. **细胞存活率**:将每个测试孔的OD值减去背景OD值(即培养基加MTT,无细胞)或药物空白孔的OD值(培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),并计算各重复孔的OD均值±SD。细胞存活率以T/C%表示,其中T为加药细胞的OD值,C为对照细胞的OD值。细胞存活率%=(加药细胞OD/对照细胞OD)×100。

b. 计算药物浓度在T/C=50%时的IC50及在T/C=10%时的IC90。

通过以上步骤,Z6·尊龙凯时的GPCR19激动剂操作能够为生物医疗相关研究提供坚实的基础。