TurboTEV蛋白酶是一种经过增强的半胱氨酸蛋白酶，源自烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白的催化片段。它能够特异性地识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly序列中的切割位点，并在Gln和Gly之间进行切割。这种蛋白酶在4°C下表现出强大的活性和高稳定性，活性不依赖于特殊缓冲液，能够在适合目标蛋白的缓冲条件下使用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，并带有GST和His标签，可以轻松通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂去除剪切标签。其来源于大肠杆菌，活性超过10单位/µg。具体而言，1单位的TurboTEV蛋白酶在30℃下能够在1小时内裂解3µg对照底物的85%。

Z6·尊龙凯时提供的协议步骤如下：

1. 溶液裂解
   1. 准备新鲜的冰冷透析缓冲液，例如：25mM Tris-HCl（pH 8.0）、150-500mM NaCl和14mM β-巯基乙醇。
   2. 将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL。如果目标蛋白在透析缓冲液中聚集，此步骤可选择不进行，并留出小部分未切割样品用于后续分析。
   3. 根据1:100的比例（w/w）添加TurboTEV蛋白酶，即每100mg目标蛋白对应使用10000 Units（1mg）的TurboTEV蛋白酶。
   4. 在4°C下透析，持续约16小时。
2. 去除TurboTEV蛋白酶
3. SDS-PAGE分析（可选）

TurboTEV蛋白酶的应用包括：

• 蛋白裂解功能
• 从重组蛋白中去除融合标签
• 蛋白质和肽的纯化

Z6·尊龙凯时常见问题解答：

1. 问：在TEV消化反应中，缓冲液条件有多重要？是否存在某些成分会对TurboTEV的剪切效率造成影响？

答：以下成分的使用建议如下：1mM DTT可以使用；不推荐加入10%甘油、20mM组氨酸、500mM NaCl和100mM Tris-HCl；β-巯基乙醇可加入，其功能与DTT类似。

2. 问：在剪切之前，是否需要对蛋白质进行缓冲液交换？

答：这可能是必要的步骤，以确保最佳的剪切效果。

TurboTEV蛋白酶在生物研究和医疗领域中展现了广泛的应用潜力，帮助科研人员高效地完成蛋白质的处理和纯化，为生物医疗研究的进步做出贡献。