### 人黏膜地址素细胞黏附分子（MAdCAM-1）Elisa试剂盒使用说明

本试剂盒仅供科研使用，不得用于医学诊断及检测。其原理为双抗体一步夹心法酶联免疫吸附法（ELISA）。在预先包被的adropin（AD）抗体微孔中，依次添加标本、标准品及HRP标记的检测抗体，经过温育和彻底洗涤后，使用底物TMB显色，最终受到酸的影响而转变为黄色。颜色深浅与样品中的adropin（AD）呈正相关，通过酶标仪于450nm波长下测定吸光度（OD值），以计算样品浓度。

### 样品收集、处理及保存方法

1. **血清**：使用不含热原和内毒素的试管，尽量避免细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟，迅速分离血清与红细胞。
2. **血浆**：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清。
3. **细胞上清液**：同样进行3000转离心10分钟以去除颗粒和聚合物。
4. **组织匀浆**：将组织加入适量生理盐水后进行搅拌，然后3000转离心10分钟取上清。
5. **保存**：如不及时检测，可按一次用量分装并冷冻于-20℃，避免多次冻融，并在室温下解冻时确保样品均匀充分解冻。

### 自备物品

1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱

### 操作注意事项

1. **试剂盒存储**：保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。注意浓缩洗涤液可能出现结晶，正常现象。
2. **试剂回存**：未用完的试剂应立即放回自封袋中并密封保存。
3. **阴性对照**：标准品S0号浓度为0，即视为阴性对照或空白；标准品样本已在说明中稀释5倍，最后结果需乘以5得到实际浓度。
4. **遵循操作步骤**：严格按照说明书中指示的时间、加液量及顺序进行操作。
5. **液体摇匀**：所有液体组分使用前必须充分摇匀。

### 试剂盒组成

|名称|96孔配置|48孔配置|备注|
|---|---|---|---|
|微孔酶标板|12孔×8条|12孔×4条|无|
|标准品|03mL*6管|03mL*6管|无|
|样本稀释液|6mL|3mL|无|
|检测抗体-HRP|10mL|5mL|无|
|20×洗涤缓冲液|25mL|15mL|按说明书进行稀释|
|底物A|6mL|3mL|无|
|底物B|6mL|3mL|无|
|终止液|6mL|3mL|无|
|封板膜|2张|2张|无|
|说明书|1份|1份|无|
|自封袋|1个|1个|无|

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、25、50、100、200、400pg/mL

### 洗板方法

1. **手工洗板**：将孔内液体甩尽，每孔加入洗涤液，静置1分钟后再甩尽，吸水纸上拍干，重复洗5次。
2. **自动洗板机**：每孔注入洗液350μL，浸泡1分钟，洗板5次。

### 操作步骤

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，其余用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔先加待测样本10μL，然后加入样本稀释液40μL；空白孔不添加。
4. 除空白孔外，其他孔中加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴或恒温箱孵育60分钟。
5. 弃去液体，拍干每孔，添加洗涤液，静置1分钟，甩去液体，重复洗板5次。
6. 向每孔添加底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。
7. 加入终止液50μL，在15分钟内于450nm波长下测定各孔OD值。

### 结果判断

绘制标准曲线：在Excel中以标准品浓度为横坐标，相应的OD值为纵坐标，绘制线性回归曲线，根据方程计算各样本浓度值。

### 试剂盒性能

1. **准确性**：标准品线性回归与预期浓度的相关系数R值应大于等于0.9900。
2. **灵敏度**：最低检测浓度小于10pg/mL。
3. **特异性**：不与其他可溶性结构类似物交叉反应。
4. **重复性**：板内、板间变异系数均小于15%。
5. **贮藏**：于2-8℃，避光防潮保存。
6. **有效期**：6个月。

### 免责声明

1. 本试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，若产生任何后果，由实验者自负责任，Z6·尊龙凯时对此不承担任何责任。
2. 实验者务必严格按照说明书进行操作，否则任何因违规操作造成的后果均由实验者承担。

通过使用Z6·尊龙凯时的人黏膜地址素细胞黏附分子（MAdCAM-1）Elisa试剂盒，您可以确保试验结果的准确性和可靠性，从而推动您的研究更进一步。